Sắc ký lỏng hiệu năng cao (tiếng Anh: High-performance liquid chromatography; viết tắt: HPLC; còn được gọi là Sắc ký lỏng áp suất cao) là một kỹ thuật trong hóa phân tích dùng để tách, nhận biết, định lượng từng thành phần trong hỗn hợp. Kỹ thuật này dựa trên hệ thống bơm để đẩy dung môi lỏng dưới áp suất cao, trong dung môi có chứa hỗn hợp mẫu, qua một cột sắc ký. Cột sắc ký được đổ bằng vật liệu hấp phụ rắn. Mỗi thành phần trong mẫu tương tác tương đối khác nhau với vật liệu hấp phụ, nên tốc độ dòng của mỗi thành phần khác nhau là khác nhau, dẫn tới sự phân tách các thành phần khì mà chúng chảy ra khỏi cột.
HPLC đã và đang được sử dụng cho những mục tiêu sản xuất, nghiên cứu và điều tra, pháp lý và y dược. [ 1 ]Sắc ký hoàn toàn có thể được miêu tả là một quy trình di dời khối lượng tương quan tới hấp phụ. HPLC dựa trên mạng lưới hệ thống bơm để đẩy chất lỏng đã bị nén và hỗn hợp mẫu qua một cột đổ bằng một chất hấp phụ, dẫn tới sự phân tách của những thành phần trong mẫu. Thành phần hoạt động giải trí của cột, chất hấp phụ, tiêu biểu vượt trội là một vật tư cấu trúc hạt làm từ những hạt rắn như silica hay polymers, có kích cỡ trong khoảng chừng 2-50 micro mét. Những thành phần của hỗn hợp mẫu được tách ra khỏi nhau bởi mức độ tương tác khác nhau với những hạt hấp phụ. Chất lỏng bị nén là hỗn hợp dung môi ví dụ nước, acetonitrile hay methanol và được gọi là ” pha động “. Thành phần và nhiệt độ của pha động đóng vai trò chính trong quy trình phân tách bằng cách ảnh hưởng tác động lên nhưng tương tác xảy ra giữa những thành phần trong mẫu và chất hấp phụ ở cột. Đây là những tương tác vật lý trong tự nhiên, như hydrophobic, lưỡng cực-lưỡng cực và ion, thường thì nhất là sự tích hợp của những tương tác .
HPLC được phân biệt với sắc ký lỏng truyền thống áp suất thấp bởi vì áp suất hoạt động của nó cao hơn nhiều (50-350 bar), trong khi sắc ký lỏng thông thường chỉ dựa trên lực hút trái đất để pha động đi qua cột. Do chỉ có một lượng nhỏ mẫu được tách bằng phân tích HPLC, cột có kích thước 2.1-4.6 mm cho đường kính và 30–250 mm cho chiều dài. Cột HPLC cũng đổ với kích thước hạt hấp phụ nhỏ hơn (trung bình kích thước hạt 2-50 micro mét). Điều này mang lại HPLC hiệu quả phân giải cao (khả năng tách biệt từng chất) khi mà tách hỗn hợp, làm cho nó trở thành phương pháp sắc ký phổ biến.
Sơ đồ của một thiết bị HPLC đặc thù gồm có cổng lấy mẫu, bơm, và một đầu dò. Cổng lấy mẫu đưa hỗn hợp mẫu và dòng pha động để đi qua cột. Hệ thống bơm đảm bảo tốc độ dòng mong muốn và thành phần của pha động qua cột. Đầu dò tạo ra tín hiệu tỷ lệ với lượng mẫu thành phần đi ra từ cột, do đó cho phép phân tích định lượng của những thành phần trong mẫu. Một bộ vi xử lý số và phần mềm điều khiển thiết bị HPLC và cung cấp dữ liệu phân tích. Một vài mẫu bơm cơ trong thiết bị HPLC có thể trộn nhiều dung môi với nhau trong những tỉ mà thay đổi theo thời gian, tạo ra thành phần gradient trong pha động. Các đầu dò như UV/Vis, PDA hay khối phổ được sử dụng phổ biến. Phần lớn các thiết bị HPLC có lò cột để điều chỉnh nhiệt độ phân tách.
Hỗn hợp mẫu để phân tích và tách có thể tích rất nhỏ được đưa vào dòng pha động đang thấm qua cột. Những thành phần của mẫu đi qua cột với tốc độ khác nhau, đây là chức năng của những tương tác vật lý cụ thể với chất hấp phụ của cột (còn gọi là pha tĩnh). Tốc độ của từng thành phần phụ thuộc vào bản chất hoá học tự nhiên nó trên pha tĩnh và thành phần của pha động. Thời gian mà một chất phân tích rửa giải ra khỏi cột gọi là thời gian lưu. Thời gian lưu được đo trong những điều kiện đặc trưng và được xem là đặc điểm nhận biệt của chất đem phân tích.
Có nhiều loại cột khác nhau, được làm bằng những chất hấp phụ có kích cỡ hạt và mặt phẳng tự nhiên biến hóa. Việc sử dụng những vật tư có hạt có kích cỡ nhỏ hơn đổ cột nhu yếu áp suất hoạt động giải trí cao hơn và nổi bật cải tổ độ phân giải sắc ký ( mức độ phân tách giữa những chất nghiên cứu và phân tích đi ra từ cột tiếp nối đuôi nhau nhau ). Xét về mặt phẳng hóa học, những hạt hấp phụ hoàn toàn có thể có cực hay không cực .Các pha động thường được sử dụng gồm có sự phối hợp hoàn toàn có thể trộn lẫn của nước với dung mỗi hữu cơ khác nhau ( phổ cập nhất là acetonitrile và methanol ). Một số kỹ thuật HPLC sử dụng dung môi không nước. Thành phần nước trong pha động hoàn toàn có thể có axít ( axít formic, photphoric hay trifluoroacetic ) hoặc muối để tương hỗ sự phân tách những thành phần mẫu. Thành phần pha động hoàn toàn có thể được giữa cố định và thắt chặt ( rửa giải đẳng dòng ) hoặc biến hóa ( rửa giải gradient ) trong quy trình nghiên cứu và phân tích sắc ký. Rửa giải đẳng dòng đặc biệt hiệu quả trong phân tách những thành phần mẫu không khác nhau nhiều về ái lực của chúng với pha động. Với rửa giải gradient thành phần của pha động được đổi khác từ thấp tới cao để tăng sức rủa giải. Sức rửa giải của pha động được phản ánh bằng thời hạn lưu của mẫu, sức rửa giải cao thì thời hạn lưu của mẫu ngắn .
- ^ Gerber, F.; Krummen, M.; Potgeter, H.; Roth, A.; Siffrin, C.; Spoendlin, C. (2004). “Practical aspects of fast reversed-phase high-performance liquid chromatography using 3μm particle packed columns and monolithic columns in pharmaceutical development and production working under current good manufacturing practice”. Journal of Chromatography A. 1036 (2): 127–133. doi:10.1016/j.chroma.2004.02.056. PMID 15146913.
