3 phương pháp enzym dùng để xét nghiệm đường máu, KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM, nxbldxh.com.vn, xét nghiệm y học, Phương pháp glucose oxydase, Phương pháp hexokinase:, Phương pháp Glucose dehydrogenase
Đường máu hay glucose máu là một xét nghiệm cơ bản dùng để đánh giá tình trạng rối loạn chuyển hóa glucid như bệnh lý đái tháo đường hay hạ đường huyết. Xét nghiệm được thực hiện bằng 2phương pháp như hóa học và enzym. Tuy nhiên hiện nay phương pháp hóa học gần như không nơi nào dùng do không đặc hiệu và mất nhiều thời gian. Phương pháp phổ biến hiện nay là dùng enzym. Phương pháp enzym có độ đặc hiệu cao và thời gian nhanh nên rất hiệu quả. 3 loại emzym phổ biến hiện nay thường dùng để định lượng glucose máu là hexokinase, glucose oxydase và glucose dehydrogenase. Trong đó phương pháphexokinase được coi là đặc hiệu và chính xác nhất. Trong khuôn khổbài viết này mình sẽ chia sẻ với các bạn nội dung của 3 phương pháp enzym dùng để định lượng glucose này.
Bạn đang xem:
Đây là phương pháp phổ biến với các hóa chất cho máy hóa sinh bán tự động và một số máy hóa sinh tự động. Phương pháp này kết hợp sử dụng emzym glucose oxydase vàPeroxydase. Nguyên lý của phương pháp như sau:
Phương pháp trải qua 2 bước. Đầu tiên glucose trong mẫu được oxy hóa bởi enzym glucose oxydase để tạo H2O2. Tuy nhiên glucose oxydase có đặc hiệu cao với β-glucose trong khi trong huyết thanh còn có cả α-glucose với tỉ lệ2/3β-glucose, 1/3 α-glucose, do vậy một số hóa chất còn có thêm cả mutarotase để chuyển α-glucose thành β-glucose. H2O2được tạo ra tỉ lệ thuận với nồng độ glucose. Sau đó H2O2 tiếp tục tham gia phản ứng với Phenol và4 amino-Antipyrin để tạo ra Quinonemin. Quinonemin có màu hồng cánh sen, đậm độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ Glucose. Quinonemin được đo ở bước sóng 540nm. Một số phương pháp có thể đo ngay lượng H2O2được tạo ra mà không cần qua giai đoạn thứ 2như máy đo đường huyết cầm tay hay máy khí máu.
Tuy nhiên trong huyết thanh có nhiều chất khửkhác như acid uric, vitamin C, bilirubin… sẽ ức chế phản ứng này do cạnh tranh với chất màu trong phản ứng (ví dụ phenol) làm kết quả thấp giả tạo. Do vậy người ta đã cho thêm 4 amino-Antipyrin để loại bỏ nhiễu bởi acid uric, creatinin hoặc hemoglobin….
Nhược điểm là còn nhiều yếu tố ảnh hưởng tác động đến phản ứng và thường làm giảm nồng độ glucose so với thực tế.
Đây là phương pháp phổ biến hiện nay trên các hệ thống máy tự động. Phương pháp này là chính xác nhất hiện nay. Bằng việc sử dụng men Hexokinase nên rất đặc hiệu với glucose mà không bị nhiễu bởi các carbonhydrat khác. Phương pháp trải qua 2 gian đoạn theo sơ đồ sau:
Giai đoạn 2: G6PD sẽ xúc tác phản ứng oxy hóaGlucose-6-Phosphat để tạo NADPH. Mật độ quang của NADPH tăng lên tỉ lệ thuận với nồng độ Glucose và được đo ở bước sóng 340 nm.
Xem thêm:
Cần lưu ý ở đây là Hexokinase xúctác phản ứng phosphoryl cả fructose và mannose, tuy nhiên nồng độ các loại đường này trong máu là quá nhỏ và không đủ để gây nhiễu cho phản ứng.
Một lưu ý nữa là huyết thanh (huyết tương) vỡ hồng cầu có thể ảnh hưởng đến phương pháp này do trong hồng cầu có G6PD và 6-phosphogluconat dehydrogenase mà cả 2 enzym nàycũng sử dụng NADP+ làm cơ chất. Do vậy ngày nay để giảm sự ảnh hưởng này người ta sử dụng G6PD của vi khuẩn (thay vì củanấm) vìG6PD củavi khuẩn sẽ sử dụng NAD+ thay thếNADP+
Đồng thời thay vì đo sự thay đổi mật độ quang củaNADPH, hiện nay một số hóa chất sử dụng thêm một chất chỉ thị như phenazin methosulphat (PMS) hoặc Idonitrotetrazolium (INT) để tham gia phản ứng vớiNADPH tạo sản phẩm màu đo được ở bước sóng 520nm.
Ưu điểm củaphương pháp này là có độ đặc hiệu cao. Kết quả ít bị ảnh hưởng bởi các yếu tố khác. Nhưng nhược điểm là giá thành hóa chất còn cao.
Đây là phương pháp được sử dụng nhiều trên các máy đo đường huyết cá nhân. Phương pháp chỉ xảy ra qua 1 phản ứng:
NADH tạo ra được đo ở bước sóng 340 nm dưới dạng động học hoặc điểm cuối. Ngoài ra người ta còn cho thêm mutarotase để chuyển cácα-Glucose sang β-Glucose giúp kết quả được chính xác hơn.
Tuy nhiên men GDH lại cũng phản ứng với các đường khác nhưmaltose, galactose hay xylose. Vì vậy nếu vì một lý do nào đó bệnh nhân có sử dụng các đường này trong điều trị sẽ làm kết quả tăng giả tạo. Để tránh sai số này ngày nay người ta sử dụng loạiGDH được phân lập từ chủng vi khuẩn Bacillus cereus rất đặc hiệu với glucose nên sẽ cho kết quả chính xác hơn và tương đương với phương phápHexokinase.
Xem thêm:
Trên đây mình đã trình bày 3 phương pháp enzym dùng để định lượng đường (glucose) trong máu. Hy vọng qua bài viết các bạn sẽ hiểu được sâu hơn thêm về nguyên lý cũng như các ảnh hưởng của các phương pháp định lượng glucose. Bài viết có thể còn nhiều thiếu sót mong bạn đọc góp ý thêm. Mọi đóng góp vui lòng phản hồi tại đây. Đề nghị ghi rõ nguồn nxbldxh.com.vn khi đăng tải lại nội dung bài viết này.
3 phương pháp enzym dùng để xét nghiệm đường máu, KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM, nxbldxh.com.vn, xét nghiệm y học, Phương pháp glucose oxydase, Phương pháp hexokinase:, Phương pháp Glucose dehydrogenase
https://4.bp.blogspot.com/-5VW9wtrKrH0/V1gku0R4_PI/AAAAAAAAC3g/NJ0t5AvQqukqNkQ94MECdgFwc24Z0JHvgCLcB/s1600/dinh%2Bluong%2Bduong%2Bmau.gif
https://4.bp.blogspot.com/-5VW9wtrKrH0/V1gku0R4_PI/AAAAAAAAC3g/NJ0t5AvQqukqNkQ94MECdgFwc24Z0JHvgCLcB/s72-c/dinh%2Bluong%2Bduong%2Bmau.gif
Loaded All PostsNot found any postsXEM TẤT CẢĐọc tiếpReplyCancel replyXóaByHomeTRANGBÀI VIẾTXem tất cảĐỀ XUẤT CHO BẠNDANH MỤCLƯU TRỮSEARCHTẤT CẢ BÀI ĐĂNGNot found any post match with your requestBack HomeSundayMondayTuesdayWednesdayThursdayFridaySaturdaySunMonTueWedThuFriSatJanuaryFebruaryMarchAprilMayJuneJulyAugustSeptemberOctoberNovemberDecemberJanFebMarAprMayJunJulAugSepOctNovDecjust now1 minute ago$$1$$ minutes ago1 hour ago$$1$$ hours agoYesterday$$1$$ days ago$$1$$ weeks agomore than 5 weeks agoFollowersFollowTHIS PREMIUM CONTENT IS LOCKEDSTEP 1: Share. STEP 2: Click the link you shared to unlockCopy All CodeSelect All CodeAll codes were copied to your clipboardCan not copy the codes / texts, please press + (or CMD+C with Mac) to copy
Đường máu hay glucose máu là một xét nghiệm cơ bản dùng để đánh giá tình trạng rối loạn chuyển hóa glucid như bệnh lý đái tháo đường hay hạ đường huyết. Xét nghiệm được thực hiện bằng 2phương pháp như hóa học và enzym. Tuy nhiên hiện nay phương pháp hóa học gần như không nơi nào dùng do không đặc hiệu và mất nhiều thời gian. Phương pháp phổ biến hiện nay là dùng enzym. Phương pháp enzym có độ đặc hiệu cao và thời gian nhanh nên rất hiệu quả. 3 loại emzym phổ biến hiện nay thường dùng để định lượng glucose máu là hexokinase, glucose oxydase và glucose dehydrogenase. Trong đó phương pháphexokinase được coi là đặc hiệu và chính xác nhất. Trong khuôn khổbài viết này mình sẽ chia sẻ với các bạn nội dung của 3 phương pháp enzym dùng để định lượng glucose này.Bạn đang xem: Glucose oxidase là gì Đây là phương pháp phổ biến với các hóa chất cho máy hóa sinh bán tự động và một số máy hóa sinh tự động. Phương pháp này kết hợp sử dụng emzym glucose oxydase vàPeroxydase. Nguyên lý của phương pháp như sau:Phương pháp trải qua 2 bước. Đầu tiên glucose trong mẫu được oxy hóa bởi enzym glucose oxydase để tạo H2O2. Tuy nhiên glucose oxydase có đặc hiệu cao với β-glucose trong khi trong huyết thanh còn có cả α-glucose với tỉ lệ2/3β-glucose, 1/3 α-glucose, do vậy một số hóa chất còn có thêm cả mutarotase để chuyển α-glucose thành β-glucose. H2O2được tạo ra tỉ lệ thuận với nồng độ glucose. Sau đó H2O2 tiếp tục tham gia phản ứng với Phenol và4 amino-Antipyrin để tạo ra Quinonemin. Quinonemin có màu hồng cánh sen, đậm độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ Glucose. Quinonemin được đo ở bước sóng 540nm. Một số phương pháp có thể đo ngay lượng H2O2được tạo ra mà không cần qua giai đoạn thứ 2như máy đo đường huyết cầm tay hay máy khí máu.Tuy nhiên trong huyết thanh có nhiều chất khửkhác như acid uric, vitamin C, bilirubin… sẽ ức chế phản ứng này do cạnh tranh với chất màu trong phản ứng (ví dụ phenol) làm kết quả thấp giả tạo. Do vậy người ta đã cho thêm 4 amino-Antipyrin để loại bỏ nhiễu bởi acid uric, creatinin hoặc hemoglobin….Nhược điểm là còn nhiều yếu tố ảnh hưởng tác động đến phản ứng và thường làm giảm nồng độ glucose so với thực tế.Đây là phương pháp phổ biến hiện nay trên các hệ thống máy tự động. Phương pháp này là chính xác nhất hiện nay. Bằng việc sử dụng men Hexokinase nên rất đặc hiệu với glucose mà không bị nhiễu bởi các carbonhydrat khác. Phương pháp trải qua 2 gian đoạn theo sơ đồ sau:Giai đoạn 2: G6PD sẽ xúc tác phản ứng oxy hóaGlucose-6-Phosphat để tạo NADPH. Mật độ quang của NADPH tăng lên tỉ lệ thuận với nồng độ Glucose và được đo ở bước sóng 340 nm.Xem thêm: Apple Watch Có Chức Năng Gì, Biểu Tượng Trạng Thái Apple Watch Cần lưu ý ở đây là Hexokinase xúctác phản ứng phosphoryl cả fructose và mannose, tuy nhiên nồng độ các loại đường này trong máu là quá nhỏ và không đủ để gây nhiễu cho phản ứng.Một lưu ý nữa là huyết thanh (huyết tương) vỡ hồng cầu có thể ảnh hưởng đến phương pháp này do trong hồng cầu có G6PD và 6-phosphogluconat dehydrogenase mà cả 2 enzym nàycũng sử dụng NADP+ làm cơ chất. Do vậy ngày nay để giảm sự ảnh hưởng này người ta sử dụng G6PD của vi khuẩn (thay vì củanấm) vìG6PD củavi khuẩn sẽ sử dụng NAD+ thay thếNADP+Đồng thời thay vì đo sự thay đổi mật độ quang củaNADPH, hiện nay một số hóa chất sử dụng thêm một chất chỉ thị như phenazin methosulphat (PMS) hoặc Idonitrotetrazolium (INT) để tham gia phản ứng vớiNADPH tạo sản phẩm màu đo được ở bước sóng 520nm.Ưu điểm củaphương pháp này là có độ đặc hiệu cao. Kết quả ít bị ảnh hưởng bởi các yếu tố khác. Nhưng nhược điểm là giá thành hóa chất còn cao.Đây là phương pháp được sử dụng nhiều trên các máy đo đường huyết cá nhân. Phương pháp chỉ xảy ra qua 1 phản ứng:NADH tạo ra được đo ở bước sóng 340 nm dưới dạng động học hoặc điểm cuối. Ngoài ra người ta còn cho thêm mutarotase để chuyển cácα-Glucose sang β-Glucose giúp kết quả được chính xác hơn.Tuy nhiên men GDH lại cũng phản ứng với các đường khác nhưmaltose, galactose hay xylose. Vì vậy nếu vì một lý do nào đó bệnh nhân có sử dụng các đường này trong điều trị sẽ làm kết quả tăng giả tạo. Để tránh sai số này ngày nay người ta sử dụng loạiGDH được phân lập từ chủng vi khuẩn Bacillus cereus rất đặc hiệu với glucose nên sẽ cho kết quả chính xác hơn và tương đương với phương phápHexokinase.Xem thêm: “Vine” Là Gì? Nghĩa Của Từ Vine Trong Tiếng Việt Vines Có Nghĩa Là Gì Trên đây mình đã trình bày 3 phương pháp enzym dùng để định lượng đường (glucose) trong máu. Hy vọng qua bài viết các bạn sẽ hiểu được sâu hơn thêm về nguyên lý cũng như các ảnh hưởng của các phương pháp định lượng glucose. Bài viết có thể còn nhiều thiếu sót mong bạn đọc góp ý thêm. Mọi đóng góp vui lòng phản hồi tại đây. Đề nghị ghi rõ nguồnkhi đăng tải lại nội dung bài viết này.3 phương pháp enzym dùng để xét nghiệm đường máu, KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM, nxbldxh.com.vn, xét nghiệm y học, Phương pháp glucose oxydase, Phương pháp hexokinase:, Phương pháp Glucose dehydrogenasehttps://4.bp.blogspot.com/-5VW9wtrKrH0/V1gku0R4_PI/AAAAAAAAC3g/NJ0t5AvQqukqNkQ94MECdgFwc24Z0JHvgCLcB/s1600/dinh%2Bluong%2Bduong%2Bmau.gifhttps://4.bp.blogspot.com/-5VW9wtrKrH0/V1gku0R4_PI/AAAAAAAAC3g/NJ0t5AvQqukqNkQ94MECdgFwc24Z0JHvgCLcB/s72-c/dinh%2Bluong%2Bduong%2Bmau.gifLoaded All PostsNot found any postsXEM TẤT CẢĐọc tiếpReplyCancel replyXóaByHomeTRANGBÀI VIẾTXem tất cảĐỀ XUẤT CHO BẠNDANH MỤCLƯU TRỮSEARCHTẤT CẢ BÀI ĐĂNGNot found any post match with your requestBack HomeSundayMondayTuesdayWednesdayThursdayFridaySaturdaySunMonTueWedThuFriSatJanuaryFebruaryMarchAprilMayJuneJulyAugustSeptemberOctoberNovemberDecemberJanFebMarAprMayJunJulAugSepOctNovDecjust now1 minute ago$$1$$ minutes ago1 hour ago$$1$$ hours agoYesterday$$1$$ days ago$$1$$ weeks agomore than 5 weeks agoFollowersFollowTHIS PREMIUM CONTENT IS LOCKEDSTEP 1: Share. STEP 2: Click the link you shared to unlockCopy All CodeSelect All CodeAll codes were copied to your clipboardCan not copy the codes / texts, please press
